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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03( e0 g2 |9 y. g' B' I9 I9 t. k
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......: A. U8 R3 F, ^
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! [+ y1 o7 S1 C- q9 f 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
& O8 p4 _8 Q4 wAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
5 d' U8 p4 u+ Z+ c; f' e Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus 9 S4 U$ v6 z; z( X2 q. Z
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 * T8 S, V& J1 }" z H% y
1 材料与方法 8 i. t3 v* z) u7 w/ y
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 ' w' D' Z4 t$ `/ i
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
5 L$ \* {- A" l7 Y* f3 n
4 v, H9 @0 R" u" S$ d
* d& H/ b) A/ w# Y! N; C
2 ]7 A3 T1 `3 D9 q1 j2 E/ G8 e6 n, ~3 o8 j: u) U: [+ m4 U1 b# w
分组号
, j; E9 }8 N6 g2 b4 h% Y( T7 ~ I因素
, R+ t& g5 T5 \5 @; Q. c) J测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
$ e6 I& A. g, d/ }; J降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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* t7 A6 Y$ q; i7 [/ h温度/2 B7 l' ?. }9 l8 e
ρ（油）/（mg.L-1)& B! v, r+ k) b- v2 z, X
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1& {6 K7 n1 o$ k8 Z+ ~
25! C7 h; v! K3 }; S, r9 W
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6 P1 `! H. R" E( Y+ l2 h
" A5 F" ^ u& k4 H E4 [
# n! z& Q/ a3 i; L1 C oR6 `! W4 a% U2 x+ ?$ V" _! P
1281 _/ D) U4 i1 `$ @' C6 J4 v$ j
44/ g, M5 s( ]. a1 e7 _: i0 q0 t
14
/ v, I3 a, k, @' Y3 P
, g' h' Y: e: b( t( g1 H% T L 4 D. N- m1 f, k( w: D1 H
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
" s, G0 F6 p, V% a6 w# i# Y& F) A; I1 F6 R4 s3 ~0 k9 ^
1 h6 Z+ B3 z3 N- z5 A
; X( s$ v% J# q, D3 b& u" m6 D
. u; ^1 m' P) r6 J+ }分组号
" T. s1 u9 {; v5 C7 L5 p因素2 t# V" W% S3 W/ t7 Y# U
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)4 _* {' K4 O: ~5 E- G3 x
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)- e( F) Q4 ]' O0 ]$ O+ q& }( L
( ?+ H# N/ {6 g. F9 W
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* Z4 A" |! Y, [1 [ρ（油）/（mg.L-1)
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299
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250 ]) a$ ]+ x1 r4 |: d2 Q$ O
574
- b- H/ L! p% P9 S. H S7 R6.0# z2 F1 |2 P3 J" o% U. K. g
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2 N+ V/ N$ x0 g# h1 \5 E! k25& O5 c6 d+ V) ~4 C
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8.0
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1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 ) I3 c# j: L& r$ s1 W
2 结果分析 1 T; O/ A7 C9 ~! z
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。 , j8 q9 b5 ?3 M4 |# ]5 V" c5 d8 V
表3 4株机油降解菌形态特征
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# t8 i) g6 b; G& q6 B形态特征7 J' {5 [8 `) C& k
ZL12 e( V5 t& d- g9 C9 Z/ j4 y2 Z' S
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淡黄9 H) U1 m& M0 z. k D" q
淡黄
0 k5 C5 _. d7 Y' r, O粉红
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& D' @" n- {, A" I( j0 x+ F菌落形态: t3 H2 g% Z) ]0 Y$ H2 }; B" l
不透明，微隆起，全缘，
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半透明，圆形，隆起，6 U3 ?( x' @3 M
不透明，米粒状突起，4 E0 S: t1 Q/ ^2 s. Z
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光滑，有光泽
! N! @/ o+ k+ ^3 g; T/ S光滑，较干燥
: G6 M* G" t7 H# q1 l& j$ ?光滑，有光泽$ g9 ~& v( c7 z
较湿润
. K$ ]! ?& @/ g4 T+ z4 x$ d/ A, {+ b8 y
菌体形态
- z: f' o. Z. v7 y( t短杆
" ?" V5 B* w+ X- F1 I球形
+ s2 z0 F, Z z; b杆状6 w0 @9 @6 F; A* W r8 X
丝状; |1 Z0 |4 {$ {8 J
9 Z) a1 _4 {' f4 V# ~" u$ v菌体大小/μm3 L! s% k$ f4 }
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）
( ^, O8 u2 i7 H$ kΦ0.3
2 V* A8 q1 M C（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
# S/ Z! F4 g& Y3 I" P' J0.2×(6-60)
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+ A+ S$ A: P+ u9 J- ^G7 E0 O& \- _( ]. p; J
* K! [2 j4 ^: c) d
初步鉴定3 Z- s5 E, K$ f8 _
黄杆菌属2 h) d* V, }" n& [; m; J% R
微球菌属
6 p1 |/ q4 p* u- I假单胞菌属
R Z1 W! Q# o' R, d5 S3 _0 f; A4 w酵母菌属& Y2 G x& }: f8 P% j, d
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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5 P; P: \& j1 K0 o/ X e3 结论 ! w9 C0 D. f0 q/ C/ Y& A1 _
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。
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. Y8 W: t! y- s4 d 作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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