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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－039 e4 F7 c9 D8 t
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......9 S# o/ Z. S! N' w8 e8 `
G! q& s9 C N' W% N9 O 2 R$ [; W0 F% P1 c4 Q2 b" e4 W
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6 a4 A- z7 H/ N0 [$ w# E- B
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! b4 _& N" l+ n0 X3 ?7 j 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
: r A6 b/ j5 I' E/ `# I4 S% C: EAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 1 D9 A2 c8 r* b+ M; o7 D% l
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
: D0 X( I1 ]* h% ]: J0 Q' r9 v0 @+ @ 近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 2 p. N& ?( z( e q5 m$ J
1 材料与方法
- k) F7 c. L7 |% W! m1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 ! v5 \* x! a' C% h$ g
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 + z! A$ k% N8 V m, z
. @+ Q) b5 n5 @% ?1 g' J; G7 |! x* q* S
; g* d8 P2 }% F' q7 L6 _+ j
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分组号5 r& J* a, H! O) e" p4 X7 n% Q
因素, ^( s' V3 t7 M5 B# S8 U' Z
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
/ H7 C8 F- g* F: X降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
- Y7 H+ X8 Z Q8 E7 M9 a8 T; ?6 C5 b4 Y# T* L1 n
温度/5 a: B; y! ?, f0 ^( h2 f! Z
ρ（油）/（mg.L-1)
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14
: J6 Q9 G/ O& \: V0 V3 ~ 0 r8 d; l' J, k2 P2 Y
6 J4 _& E/ G5 b8 I' X0 I' N表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
! Q1 v1 b, G8 ]2 m# L4 y. r
, ^$ }5 k% n% r/ I3 k7 P* R* @5 ]$ a! W1 |
& C/ U0 @1 R3 E
}* p1 T8 R6 _, m1 b _% X分组号
& {8 M* D1 f' b. j因素3 Z. T. y+ {3 q3 C# m4 z
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)$ g6 l; H7 {8 N7 l5 o& F# d
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)7 V) T8 Z, M) D' B6 `/ ~" c
# x* _1 x( U8 I" p4 c
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3 m i& f7 q: L% |6 }# Lρ（油）/（mg.L-1)
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4.0
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25* l6 ]- Y, [( Z; J: k
574' @4 c; s- V9 }3 Q' F! A% e7 k
6.0 w6 Z: O2 ^& u$ ~9 M$ |; O
2671 e* r" o2 h; B. l
307
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3
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B6 k5 ^+ W) J- N) S- _$ u6 B- q1 E @5 }% I! S( X
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- K. U; `( m" z264
8 H1 e6 V6 d4 H+ V& j4 d& H6 K
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) G# h7 D1 L7 Z+ U6 u1 C
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) ~' v5 {5 M" o+ m% n16
9 v& `' ^& G. M0 e4 w25" U# ^! n: _; c
0 y' c# U4 t+ B
1 J" U4 v5 p2 Y# W: m$ M/ F3 ]2 A1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
3 z6 T; D- d( c$ X G2 结果分析
) _" L$ n! O; s% i; z2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
% _. d3 i; Q2 E' J表3 4株机油降解菌形态特征 ( R" h- I; `. R2 _- i+ w
1 v. j0 l% t; ~8 S- f1 s% Z, Z6 ]+ i( i% p9 b
+ j8 }1 [; J0 y6 A: _
% C1 M$ A0 v8 x3 G) u: ~8 I, f
形态特征2 m, }1 O" x1 D; P) Z, _* s$ Z: T
ZL1; g" r/ f9 x+ ^1 |% |- \
ZL26 O' D! f! X' a, R
ZL3
m' c* W& P* z! qZL4; Y# {/ Z z- f+ m6 G9 I/ u
8 `5 w7 w( B* s: f+ _4 h
菌落颜色
( G2 E6 ], W* ?9 D0 i粉红
' [# S# K5 Z5 ?1 Z# J+ M淡黄
$ S! P* _# B* }# s0 ^0 Y淡黄, y# \' H5 m' k$ O4 W: s
粉红 C9 j1 Z+ E5 W- C
# o1 }" [' \) [& x1 r
菌落形态
1 g) Z$ c6 A, }% H; _2 Z不透明，微隆起，全缘，' ~0 @6 Z. @# K( \
半透明，圆形
8 K n( X# J2 q0 l半透明，圆形，隆起，
Q8 K3 b9 \8 z, |0 W9 E3 G不透明，米粒状突起，0 N. B& r+ v8 l& n; R
* i5 {& Y6 n, R: F: ~
2 b0 B- v& w3 S6 @; h0 I: W
光滑，有光泽
7 ^) K" f4 ]. O; [* {. H光滑，较干燥
, y) V% f( Y2 P9 _光滑，有光泽
& U2 }8 N' L8 B较湿润
; [) m" W- {6 t) z1 m
) {8 ]6 b" [- | c菌体形态; y7 O+ c) l& L2 N5 ~' X" J
短杆
2 l3 `4 Z. U, f% [5 G球形
0 @2 K u9 f6 u \杆状) C6 H8 G0 M+ z, e* W
丝状
2 v0 X2 U9 G6 e' o- t& r9 W$ ^" ?( k
菌体大小/μm) p9 j5 v y3 D) _: i# I$ d, O
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）2 S8 C0 S' H S- e% r: K
Φ0.3# N% D1 c( V9 F$ s$ ~* k% U9 z% R |
（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
9 \% N) \3 _& p* J% q0.2×(6-60)' D( G" \2 K& Q
6 ]& T% s D! I; }9 L* j
革兰氏染色
8 [' K0 G) s' v# yG
% E4 ~' }0 S* P: E1 p6 PG
3 M& k6 |# E3 l+ _! ~G7 }) l+ u3 [/ R
G6 h6 ?4 @, F. I& `
: E& C) f& t! l初步鉴定
5 @. a. \ s* L/ q& b6 `4 ^0 Q黄杆菌属
. N3 ^- a C; q3 `2 L$ r微球菌属
2 _. n4 _9 G/ [' V4 @: b假单胞菌属
4 r1 Z0 f6 f; L! D7 J' L- ]# ]酵母菌属
$ `; t3 V! \ c% y+ \ m7 y2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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3 结论 , p, t" n+ f Q' e/ Q1 t
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 0 M# m- |3 l7 T& Q
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。/ s' w4 X8 |( E W$ {5 l( I3 w
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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